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                  上海蒲柘光电仪器有限公司

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                  技术支持

                  共聚焦显微镜技术简介

                  来源:转载 作者:上海蒲柘光电 日期:2018-09-13 11:19:37

                   共聚焦显微镜与传统的宽视场光学显微镜相比具有多种优势,包括控制景深,消除或减少远离焦平面的背景信息(导致图像质量下降)的能力,以及收集串行光学部分的能力来自厚厚的标本。共聚焦方法的基本关键是使用空间滤波技术消除厚度超过直接焦平面的样本中的焦外光或眩光。近年来共聚焦显微镜的普及程度出现了巨大的爆炸性增长,部分原因在于从传统荧光显微镜制备的样品中获得极高质量图像的相对容易性,以及细胞生物学应用的增加这依赖于固定和活细胞和组织的成像。实际上,共焦技术被证明是光学显微镜中有史以来最重要的进步之一。(蒲柘光电显微镜版块发布)

                  在传统的宽场光学落射荧光显微镜中,样品发出的二次荧光经常通过激发体积发生,并且模糊了位于物镜焦平面中的特征的分辨率。较厚的试样(大于2微米)使问题复杂化,这通常表现出如此高的荧光发射,大部分精细细节都会丢失。共聚焦显微镜在轴向(z ;沿光轴)和横向(xy方面仅提供了微小的改善在样本平面中)光学分辨率,但是能够从焦平面移除的区域中排除二次荧光而不是所得到的图像。尽管共聚焦显微镜相对于传统的宽场技术在某种程度上提高了分辨率,但它仍远低于透射电子显微镜。在这方面,共聚焦显微镜可以被认为是这两种经典方法之间的桥梁。(蒲柘光电显微镜版块发布)

                  图1中显示了一系列图像,这些图像比较了传统宽场和激光扫描共聚焦荧光显微镜中的选定视场。在宽场荧光中荧光染色的人髓质的厚切片显示出来自焦平面上方和下方的荧光结构的大量眩光(图1(a))。当用激光扫描共聚焦显微镜成像时(图1(d)),髓质厚部分显示出显着程度的结构细节。同样地,用荧光素染色的整个兔肌纤维的宽场荧光成像产生模糊图像(图1(b))缺乏细节,而相同的样品?。ㄍ?(e))显示共聚焦显微镜中的高度条纹形貌。向日葵花粉粒中的自发荧光产生基本外部形态的模糊轮廓(图1(c)),但没有表明内部结构。相比之下,采用共聚焦技术获得的相同颗粒(图1(f))的薄光学部分显示出颗粒核心与周围包络之间的显着差异。(蒲柘光电显微镜版块发布)

                  (文章转自olympus-lifescience)

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